一﹑[目的要求]
通过本实验了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法
学习SDS-PAGE的基本操作，学会用SDS-PAGE检测蛋白
二﹑[实验原理]
将外源基因克隆在含有lac启动子的表达载体中，让其在大肠杆菌中表达。先让宿主菌生长，lacI产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合，从而不能进行外源基因的转录和表达，此时宿主菌正常生长。然后向培养基中加入lac操纵子的诱导物IPTG，阻遏蛋白不能与操纵基因结合，则外源基因大量转录并高效表达。
表达蛋白可经SDS-PAGE检测。蛋白质与SDS结合后均带有负电荷，在电场作用下按相对分子
量大﹑小在板状胶上排列。
三﹑[教学内容]
1.外源基因在大肠杆菌中的诱导表达
2.SDS-PAGE凝胶的配制
3.诱导表达的外源基因的检测。
四﹑[实验材料和用品]
超净工作台、恒温摇床、生化培养箱、LB培养基、IPTG、表达外源基因的质粒大肠杆菌、对照菌; 蛋白质电泳系统、SDS、丙烯酰胺、Bis、TEMED、Aps、低相对分子质量标准蛋白、醋酸、甘氨酸、考马斯亮蓝
五.[实验步骤]
见教材
六.[结果与分析]
SDS—PAGE检测表达蛋白结果
七.[问题与讨论]
1.外源DNA在宿主中表达的原理是什么?
2. SDS—PAGE应注意哪些问题?
