实验目的:
1、 掌握酸性磷酸酶的显示方法及原理;加深对细胞化学法技术原理的认识
2、 观察酸性磷酸酶在细胞内的分布状况;
实验原理:酸性磷酸酶能分解磷酸脂而释放出磷酸基,在pH5.0的环境中,磷酸基能与铅盐反应形成磷酸铅沉淀,但因其无色,固再经过与硫化铵作用形成棕黑色的硫化铅沉淀,由此九显示酸性磷酸酶在细胞内的存在与分布。
ß-甘油磷酸钠—(磷酸酶—Ph5.0) 甘油+磷酸根 + 铅盐 磷酸铅(无色沉淀)+ 硫化铵 硫化铅(棕黑色沉淀)
实验用品:
1、小鼠腹腔液的制备;
2、试剂:10 %中性福尔马林固定液; 酸性磷酸酶作用液; 1 % 硫化铵溶液
吉目萨染液(1:30); 6 % 淀粉肉汤
实验操作:
杀鼠取腹腔液——制鼠腹腔液涂片——固定——水洗——磷酸酶作用液——充分水洗——硫化铵作用——水洗——吉目萨染液复染——观察
实验报告:
1、 酸性磷酸酶的显示方法、原理及结果。
2、 指出本实验中应特别注意的几个环节。