一、目的与要求
了解Feulgen反应的基本原理,学习其操作方法和压片法,初步掌握细胞分裂各期的主要特点。
二、实验原理
Feulgen反应的原理是根据DNA经弱酸(1mol/L盐酸)水解后,打开料嘌呤和脱氧核糖连接的键,在脱氧核糖的一端形成有离的醛基。这些醛基就在原位与Schiff试剂结合,形成含醌基(紫红色)的化合物,醛基是一个发色团所以具有颜色,因此凡有DNA的部位,就呈现紫红色。
对照组预先用热三氯乙酸或DNA酶处理材料。
三、实验内容
1. DNA的显示法-Feulgen反应
2. 压片法
3. 细胞有丝分裂相的观察
四、实验步骤
DNA的显示法-Feulgen反应
以蚕豆根尖或洋葱根尖为材料,进行Feulgen反应的具体操作程序如下:
1 切取根尖 长度0.3-0.5cm
2 Camoy固定剂 固定10-30分钟
3 95%酒精 10分钟
4 70%酒精 10分钟
5 蒸馏水 →(对照) 5%三氯醋酸 90oC 15分钟
6 1mol/L HCl ← 蒸馏水 室温
7 1mol/L HCl 60 oC 8分钟
8 Schiff试剂 40 -60分钟
9 亚硫酸水(1,2,3) 换3次,每次5分钟
10 自来水 将染色后的根尖漂洗干净,悬着染色效果好的材料
11 蒸馏水
12 压片
13 镜检
五、作业:
1.说明Feulgen反应的基本原理和实验中应注意的事项。
2.绘出显微镜下观察到的实验结果。