实验目的：
用以强化、系统前几次实验的知识与技能，学会对任一细胞结构进行分离研究的基本技能，初步掌握实验过程设计和统筹实验过程的技能。
实验原理：细胞由细胞膜、细胞质和细胞核等各种亚细胞结构组成。对于细胞结构与功能的研究是细胞生物学的重要课题。其重要的研究手段之一是分离纯的亚细胞组分，观察它们的结构或进行生化分析。这种拆离方法使细胞中的各种生物学过程彼此分开，互不甘扰，便于确定一种复杂过程中的细节。
分离亚细胞组分主要是差速离心法和密度梯度离心。差速离心法适于分离密度和大小有显著数量级差别的颗粒，用于分离细胞器是成功和有效的，也是常用的；对于精细的分步分离，则密度梯度离心效果更好。故本实验主要利用差速离心技术。
对离心分离得到的组分不能仅依据书本或其他资料来臆断，而应采用相应技术加以鉴定，才能获得可靠的结论而不出现错误。鉴定特定结构的方法多种多样，如线粒体用詹纳斯绿B染色鉴定等。
实验用品：
1.材料：大鼠肝脏、鸡肝、猪肝或植物叶片、块茎等。
2.试剂：0.25mol/L蔗糖+0.01mol/LTris-盐酸缓冲溶液，
0.34mol/L蔗糖+0.01mol/L Tris-盐酸缓冲溶液，
0.88mol/L蔗糖+0.01mol/LTris-盐酸缓冲溶液，
0.34mol/L蔗糖+0.01mol/L Tris-盐酸缓冲溶液，
姬目萨染液， RSB溶液； 甲基绿-派洛宁染液； 卡诺固定液；
1％詹纳斯绿B； 丙酮； 酸性磷酸酶作用液； 2％乙酸水溶液
葡萄糖-6-磷酸酶显示试剂； 1％硫化铵水溶液； 50％甘油水溶液
实验过程： 制备细胞匀浆——差速离心——细胞核的纯化与鉴定——收集质膜——线粒体的分离与鉴定——溶酶体的分离与鉴定
作业：
1.写出实验体会。
2.拟定出分离铁皮石斛或马拎薯各亚细胞结构的实验方案。 |
